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  cDNA文库构建  
 

 

 

 

技术简介:

cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录形成的互补DNAcDNA)与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌形成重组DNA克隆?#28023;?#36825;样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映?#25345;?#32452;织或细胞中,在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因,因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。cDNA文库比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞或组织特异表达的基因。cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究?#33455;?#26377;更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。

经典cDNA文库构建基本原理:用OligodT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA 加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得cDNA文库。其基本步骤包括?#28023;?SPAN lang=EN-US>1mRNA的提取。获取高质量的mRNA是构建高质量的cDNA文库的关键步骤之一。(2cDNA第一条链的合成。(3cDNA第二条链的合成。(4)双链cDNA的修饰。(5)双链cDNA的分子克隆。(6cDNA文库的扩增。(7cDNA文库鉴定评价。

客户须知:

1. 客户须在实验开始前确保其提供材?#31995;?#25968;量和质量,并提供相关信息。

客户可提供组织(2001000μg)、细胞(106)或总RNA >1μg ),请务必保持样品新鲜,RNA无任何?#21040;猓?#26893;物材料应避免过?#31995;?#32452;织,尽量用柔嫩部位,以确保文库质量。同时请尽量提供物种基因组背?#30333;?#26009;信息,如:基因组大小,基因平均长度,预计表达的基因数量等等。

材料具体要求:

    A. 动物、植物、微生物组织 请提供足量的新鲜样品(4℃保存,不超过一天)或将新鲜样品立?#21019;?#20110;液氮或-80℃后保存不超过一个星期。

注意: 用植物样品构建基因组文库,为了降低文库中的叶绿体污染,样品须是植物的黄化苗嫩芽。若需建cDNA文库,样品必须是新鲜保存的。
   
B. RNA 如要提供RNA,要求总RNA500ug,浓度>1ug/ulmRNA3ug,浓度>50ng/ulOD260/OD280值:2.0,以我方电泳?#21644;肌⒆贤?#20998;析仪定量检测为准。 RNA的总量根据库容量不同会有所增加。

注意: a) 建议由我方提取RNAb) 对于客户提供的RNA,由于样品原因建库可能没有结果或结果不好,其损失和责任全部由样品提供方承担;c)由样品质量产生的任何问题,其损失和责任应全部由样品提供方承担。 

2. 本公司在收到客户提供的研究材料后会在第二个工作日起开始服务工作。

3. 工作完成后,本公司会将结果及时发给客户,同时根据客户要求处理相关材料。

4. 客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失全部由客户承担。

服务?#20449;担?/SPAN>

1. 本公司将在保证质量的前提下,在最短的时间内完成实验。

2. 本公司保证检测结果准确、客观、可信。

3. 公司将对所有技术服务相关材料信息保密,并会在服务完成后按客户要求对相关材料进行合理处理。

服务周期:

实验周期?#35805;?#20026;得到合格的总RNA1545个工作日。

1. 从客户提供的材料中提取高质量的mRNA

2. 根据客户需求构建普通cDNA文库、全长cDNA文库和均一化cDNA文库。

服务内容:

公司拥有一批优秀的文库构建专业技术人?#20445;?#21487;以提供标准化cDNA文库构建以及EST测序和分析服务,可以针对动物、植物、微生物等的组织和细胞等材料进行文库构建(普通cDNA文库、全长cDNA文库和均一化cDNA文库)。
   
1)普通cDNA文库(质粒文库、噬菌体文库)构建
   
文库特点:

A.材料用量少,只需要1mgTotal RNA

B.采用Clontech SMART专利技术,技术成熟,全长比率高。

2)均一化文库构建
   
均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库筛选和分析带来障碍的有效措施,有利于研究基因的表达和序列分析。我们基于双链特异性核酸酶(Duplex-Specific Nuclease DSN)?#21335;?#36827;cDNA文库均一化技术构建均一化cDNA文库,能减低高丰度表达基因100倍以上,有效富集?#22836;?#24230;表达基因。

文库特点:
   
1.
无需反复杂交过程,均一化程度高。
   
2.均一化后平均插入片断大小无明?#21592;?#21270;。

3)全长文库构建
   
利用公司专有技术和专门试剂盒,进行全长文库构建服务。尤其适合希望获得高比例全长基因的客户。

文库特点:

1.不经过PCR过程,容易获得?#22836;?#24230;基因

2.全长比例高(全长比例>80%
   
3.样品用量大,需要25mgmRNA,因此,不适合样品量少的材料。

交货产品:

A. 产物电泳?#35745;祝?SPAN lang=EN-US>

B. 初始库,保存在-20℃;

C. 文库评价数据,包括库容量,插入片段平均长度,重组效率,cDNA完整性评价等。技术指标:库容≥1.0×106insert400 bp,平均 insert1.3Kb

D. 实验报告(包括实验流程,材料?#22836;?#27861;等)。

优惠报价:

cDNA文库构建:1-3万元人民币

全长cDNA文库构建:3.0-5.0万元人民币

均一化cDNA文库构建:3.5-6万元人民币

cDNA测序: 

10,000条序列         20/

5,000-10,000条序列         25/

5000条序列          30/

信息服务:1.5-4.0万元

基本信息服务:从峰图到序列的转化,控制低质量,去除载体序列;序列拼接;EST注释;ORF预测及分析;利用 nrnt数据库进行注释。

高级信息服务:代谢途径分析;功能蛋白分析;Interpro功能域分析;序列属性及其对应unigene分析;COG分析;EST相关网络数据库构建。

 

 

 
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